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    关于使用冷冻干燥机进行冻干保存细菌的方法及步骤

    2017-04-19 11:42:47  来源:上海桂戈实业有限公司
    冻干保存细菌方法及步骤:
    一、所用培养基/液:LB培养液,TSB培养液,FT培养液,麦康凯培养基,TSC培养基,TSA培养基等。
    二、冻干保护剂:10%脱脂奶粉,5%蔗糖,1%明胶,溶于纯水中。
    三、其他试剂:小牛血清,NAD,环丝氨酸等。
    四、常见细菌:大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、鸭疫里默氏杆菌、副猪嗜血杆菌等。
    五、操作步骤:
    1.所用培养基及冻干保护剂均高压灭菌;
    2.取分离所得细菌菌液或甘油保存的细菌一环,在培养板上分区或蛇形划板(大肠杆菌在麦康凯平板上划板),37℃倒置培养过夜;
    3.取一只干净的试管,倒入约10mL培养液(大肠杆菌用LB培养液),从培养过夜的平板中挑取一个单菌落于该培养液中,37℃振荡培养过夜;
    4.取10个干净的西林瓶,每瓶加入1mL冻干保护剂,再加入1mL培养过夜的菌液,盖上橡胶塞,留出气孔,标记好之后放入-80℃冰箱使其冷冻;
    5.细菌冻干机预热约30min,迅速将已冷冻的菌液放于细菌冻干机上,一般十几小时之后细菌已冻干,关闭冻干机,取出已冻干的细菌,压盖,放于-80℃超低温冰箱保存,可达十年之久。

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